"כפי שכולנו יודעים, PCR היא שיטה ניסויית בסיסית במעבדות ביוכימיות". תוצאות הניסוי תמיד אינן משביעות רצון, מה שעשוי לנבוע מזיהום קל של חומרים מתכלים מפלסטיק PCR, או הפרעה ניסויית הנגרמת כתוצאה מהחדרת מעכבים. יש עוד סיבה חשובה מאוד: בחירה לא נכונה של חומרים מתכלים תשפיע מאוד גם על תוצאות הניסוי.
ישנן סיבות רבות המשפיעות על תוצאות ניסויי PCR: בדרך כלל יש את 7 הסוגים הבאים.
1. פריימרים: פריימרים הם המפתח לתגובה הספציפית של PCR, והספציפיות של מוצרי PCR תלויה במידת ההשלמה בין הפריימרים ל-DNA של התבנית;
2. אנזים וריכוזו;
3. האיכות והריכוז של dNTP;
4. תבנית (גן מטרה) חומצת גרעין;
5. ריכוז Mg2+;
6. הגדרת טמפרטורה וזמן;
7. מספר מחזורים;
8. ציוד, חומרים מתכלים וכו'.
בין הגורמים המשפיעים הרבים, חומרים מתכלים הם אחד הגורמים החשובים מאוד וקל להתעלם מהם.
ישנם סוגים רבים של
חומרים מתכלים PCR: 8 צינורות, צינורות בנפח נמוך, צינורות סטנדרטיים, ללא חצאית, חצי חצאית, חצאית מלאה וסדרה של לוחות PCR ו-qPCR. זה מאוד קשה לבחור, ויש הרבה בעיות נפוצות, בואו נסתכל על הבעיות שכולם בוחרים
חומרים מתכלים PCR, ואיך לפתור אותם?
למה
חומרים מתכלים PCRבדרך כלל עשוי PP?
תשובה: חומרים מתכלים של PCR/qPCR עשויים בדרך כלל מפוליפרופילן (PP), מכיוון שהוא חומר אינרטי ביולוגית, פני השטח אינם קלים להדבקה לביו-מולקולות, ויש להם עמידות כימית טובה וסבילות לטמפרטורה (ניתן לבצע חיטוי ב-121 מעלות) חיידקים ויכול לעמוד גם בשינויי טמפרטורה במהלך רכיבה תרמית). חומרים אלו נמצאים בדרך כלל במגע ישיר עם ריאגנטים או דגימות, ולכן יש לבחור חומרים איכותיים וטכניקות עיבוד טובות במהלך תהליך הייצור וההכנה.